标题:人PDCD4启动子真核报告质粒的构建和鉴定
作者:刘凤鸣;张霞;宋兴国;姜杨;张利宁
作者机构:[刘凤鸣] 山东大学医学院免疫学研究所, 济南, 山东 250012, 中国.;[张霞] 山东大学医学院免疫学研究所, 济南, 山东 250012, 中国.;[宋兴国] 山东大学医学院免疫学 更多
来源:山东大学学报. 医学版
出版年:2010
卷:48
期:5
页码:32-35
关键词:程度性死亡因子4; 启动子; 荧光素酶; 报告基因
摘要:目的克隆人程序性死亡因子4(PDCD4)基因的启动子,插入荧光素酶报告基因载体中,并在细胞内检测其活性,为进一步研究PDCD4表达调控奠定基础. 方法采用PCR技术,从人基因组DNA中扩增出PDCD4启动子,插入荧光素酶报告基因载体pGL4-Basic中,测序所扩增的DNA序列,并将构建的 pGL4-PDCD4-P1荧光素酶报告质粒,与内参照pRL-TK用脂质体法瞬时共转染OVCAR3,SKOV3细胞系,通过双荧光素酶活性检测确定其 启动子活性. 结果测序结果表明,扩增的PDCD4启动子序列正确,pGL4-PDCD4-P1转染OVCAR3细胞(高表达内源性PDCD4)24h后,双荧光素酶活 性检测显示其启动子相对活性约为pGL4-Basic空载体的67倍;而pGL4-PDCD4-P1转染低表达内源性PDCD4的SKOV3细胞后相对活 性约为15倍. 结论成功构建PDCD4启动子的克隆及人PDCD4启动子报告基因,为后续研究奠定了基础
收录类别:CSCD
资源类型:期刊论文
原文链接:http://kns.cnki.net/kns/detail/detail.aspx?FileName=SDYB201005010&DbName=CJFQ2010
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