标题:新城疫病毒融合蛋白胞内尾部关键氨基酸定位
作者:张弛; 迟苗苗; 刘颖; 刘亚轻; 黄亚楠; 温红玲; 赵丽; 王志玉
作者机构:[张弛]山东大学公共卫生学院病毒学研究室, 济南, 山东 250012, 中国;[迟苗苗]山东大学公共卫生学院病毒学研究室, 济南, 山东 250012, 中国;[刘颖]山东大学公共卫 更多
来源:病毒学报
出版年:2019
卷:35
期:4
页码:639-647
DOI:10.13242/j.cnki.bingduxuebao.003567
关键词:新城疫病毒(NDV); 融合蛋白(F); 胞内尾部(CT)
摘要:新城疫是由新城疫病毒(Newcastle disease; virus,NDV)引起禽的一种急性、热性、败血性和高度接触性传染病,具有很高的发病率和病死率,对养禽业危害极大。为了探讨新城疫病毒融合蛋白(F; usion protein,F)胞内尾部(Cytoplasmic tail,CT)后段的氨基酸(Amino; acid,aa)在细胞融合中的作用,定位该区域影响F蛋白功能的关键氨基酸,本研究利用基因定点突变和体内同源重组技术构建7个突变体,经BHK-21; 细胞表达后,分别用间接免疫荧光法和流式细胞术定性和定量检测各突变体蛋白的表达效率,采用R18染料转移实验、指示基因法、吉姆萨染色对各突变体蛋白促; 细胞融合的三个阶段分别进行分析,并利用Western; Blot检测突变体功能的改变是否与F蛋白的裂解活化有关。结果显示,与野生型F蛋白相比,突变体N542A、L544A、M547A的半融合活性均发生; 了显著变化,分别为野生型的189.8%、58.5; %和17.3%,而突变体G540A、N541A、G545A、Q546A的半融合活性处于野生型的80.1 %~117.5; %之间(P均大于0.05)。突变体N542A、L544A、M547A的内容物混合能力分别为野生型的248.5%、62.2; %和12.6%,其它突变体的内容物混合能力处于野生型F蛋白的95.8%~119.9; %之间(P均大于0.05)。突变体L544A和M547A形成合胞体的大小与数目均有下降,其中M547A几乎丧失了形成合胞体的能力,突变体N542; A形成的合胞体的能力则大幅上升。除了M547A的表达水平有所降低之外(为野生型的66.3%),其它各突变体F蛋白在细胞表面的表达水平均处于野生型; F蛋白的91.3 %~111.4 %之间(P均大于0.05)。由此可见,NDV; F蛋白胞内尾部N542、L544和M547为关键氨基酸,对F蛋白的融合活性起到了重要作用。
收录类别:CSCD
资源类型:期刊论文
原文链接:qikan.cqvip.com/Qikan/Article/Detail?id=7002681548
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