标题:弓形虫SAG1-MIC3融合基因真核表达载体的构建与鉴定
作者:田小东;古钦民;周怀瑜;张加勤;丛华;赵群力;李瑛
作者机构:[田小东] 山东大学医学院寄生虫学教研室, 济南, 山东 250012, 中国.;[古钦民] 山东大学医学院寄生虫学教研室, 济南, 山东 250012, 中国.;[周怀瑜] 山东大学医学院 更多
来源:中国病原生物学杂志
出版年:2008
卷:3
期:3
页码:190-193+214
关键词:刚地弓形虫; 疫苗; 构建; 表达
摘要:目的构建编码弓形虫RH株膜表面蛋白1(SAG1)和微线体蛋白3(MIC3)的重组真核表达载体pcDNA3.1-SAG1-MIC3并鉴定,为弓形虫 疫苗研制作准备。方法采用PCR技术从弓形虫基因组DNA中分别扩增SAGl和MIC3基因片段。分别克隆人pMD18T载体,并对重组人外源基因的质粒 通过PCR、酶切和测序鉴定;采用亚克隆技术将SAG1和MIC3基因克隆至真核表达载体pcDNA3.1(-),经含氨苄青霉素的LB平板筛选阳性重组 质粒pcDNA3.1-SAG1-MIC3,PCR、酶切和测序鉴定;采用脂质体法将重组载体转染Hela细胞,经RTPCR法检测转染细胞转录情况。结 果MIC3和SAG1基因的TA-cloning经PCR和酶切鉴定,大小分别为933bp和789bp,与预期值一致;pcNDA3.1-SAG1-M IC3经酶切鉴定,目的片段约为1722bp.与SAG1MIC3长度相当;测定重组载体的核苷酸序列。与GenBank中的相应序列100%同源;PC R验证载体携带的SAG1-MIC3融合基因在Hela细胞中转录生成mRNA。结论成功构建重组真核表达载体pcDNA3.1SAG1-MIC3.为弓 形虫核酸疫苗的研制奠定了基础。
收录类别:CSCD
资源类型:期刊论文
原文链接:http://kns.cnki.net/kns/detail/detail.aspx?FileName=ZISC200803011&DbName=CJFQ2008
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