标题:艾滋病痴呆综合症患者体内HIV-1tat基因的克隆及原核表达
作者:蒲双双;闫玉芬;高文花;温红玲;宋艳艳;许洪芝;赵丽
作者机构:[蒲双双] 山东大学公共卫生学院微生物检验研究所, 济南, 山东 250012, 中国.;[闫玉芬] 山东大学公共卫生学院微生物检验研究所, 济南, 山东 250012, 中国.;[温红玲 更多
来源:山东大学学报. 医学版
出版年:2010
卷:48
期:10
关键词:艾滋病痴呆综合症; HIV-1反式激活因子; pGEX-KG载体; 基因表达
摘要:目的 探讨艾滋病痴呆综合症(AIDS dementia complex,ADC)患者体内外周和中枢不同组织部位的人类免疫缺陷病毒Ⅰ型(HIV-1)反式激活因子(tat)第一外显子基因序列的变异并对其进 行表达,用于研究HIV-1Tat变异对其神经毒性的影响. 方法 从ADC病例尸检标本的脾脏(spleen, SPL)、脑膜(meninges, MG)和基底核(basal ganglia,BG)3个部位的组织中提取基因组DNA,用PCR方法扩增出tat第一外显子基因,并将其插入到pGEM-T克隆载体中,测序证实为H IV-1tat基因, BioEdit软件对测序结果进行比对. 将克隆载体双酶切,回收目的基因,并将其连接到pGEX-KG表达载体中,将重组表达质粒pGEX-KG-tat转化BL21大肠杆菌,异丙基-beta -D-硫代半乳糖苷(IPTG)进行诱导表达,表达产物用SDS-PAGE和W estern blot进行检验和鉴定. 结果 成功克隆了HIV-1 tat第一外显子基因,序列比对发现外周和中枢部位的Tat氨基酸序列不同;构建了pGEX-KG-tat重组表达载体,并在原核细胞中高效表达了谷胱甘 肽巯基转移酶(GST)融合Tat蛋白, SDS-PAGE和W estern blot分析表明,所表达的蛋白为Tat蛋白. 结论 ADC患者外周和中枢不同组织部位的HIV-1tat第一外显子基因所编码的Tat蛋白氨基酸序列存在变异,在原核细胞中对其进行了高效表达,为Tat蛋 白的神经毒性研究奠定了基础
收录类别:CSCD
资源类型:期刊论文
原文链接:http://lib.cqvip.com/qk/95413A/201010/35970585.html
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