标题:抗脱氧雪腐镰刀菌烯醇单克隆抗体的制备及鉴定
作者:赵丽;温红玲;侯霄煜;蒲双双;宋艳艳;许洪芝;李凤琴
作者机构:[赵丽] 山东大学公共卫生学院微生物检验所, 济南, 山东 250012, 中国.;[温红玲] 山东大学公共卫生学院微生物检验所, 济南, 山东 250012, 中国.;[蒲双双] 山东大学 更多
来源:山东大学学报. 医学版
出版年:2010
卷:48
期:12
关键词:脱氧雪腐镰刀菌烯醇; 单克隆抗体; 特性鉴定; 亲和常数
摘要:目的 制备抗脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)单克隆抗体(McAb)并对其进行初步鉴定. 方法 采用小剂量长周期的免疫方案,以DON-牛血清白蛋白(BSA)偶联物免疫雌性BALB/c小鼠,采用细胞融合的方法制备杂交瘤细胞株,酶联免疫吸附试验 (ELISA)检测上清中McAb,对抗体分泌阳性的细胞株进行克隆化,直至抗体阳性率 100%,用竞争抑制ELISA法进一步检测McAb的特异性,腹水诱生法制备大量McAb,并用饱和硫酸铵对其进行纯化,用抗体亚类鉴定试剂盒对该Mc Ab亚类进行鉴定, BCA蛋白测定试剂盒测定蛋白含量, ELISA检测McAb的滴度、参考工作稀释度和亲和常数. 结果 DON-BSA免疫的BALB/c小鼠血清效价为1:256 000,与BSA有强烈的交叉反应. 细胞融合后,ELISA筛选抗体分泌阳性的杂交瘤细胞株,经3轮克隆化,建立了1株能稳定分泌抗 DON-BSA McAb的杂交瘤细胞株3G_5,腹水诱生法制备了大量的McAb. 该McAb属IgG_1, IgG含量为6.06g/L,抗体滴度为1:500 000,参考工作稀释度为1:64 000,抗体亲和常数为1.62*10~9. 用间接竞争抑制ELISA测得校正曲线线性范围9.8~10 000ng/mL,线性方程Y=-0.272 6X+0.225 9(r=0.930 9). 结论 获得了分泌抗 DON-McAb的杂交瘤细胞株,该单克隆抗体灵敏度高,特异性强,可用于制备高质量国产DON-ELISA检测试剂盒
收录类别:CSCD
资源类型:期刊论文
原文链接:http://lib.cqvip.com/qk/95413A/201012/37349086.html
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