标题:人Tim-3启动子的克隆及其真核报告质粒的构建
作者:张洪昆;鞠瑛;栾芳;郭春;马春红
作者机构:[张洪昆] 山东大学医学院免疫学研究所, 济南, 山东 250012, 中国.;[鞠瑛] 山东大学医学院免疫学研究所, 济南, 山东 250012, 中国.;[栾芳] 山东大学医学院免疫学研 更多
来源:山东大学学报. 医学版
出版年:2008
卷:46
期:2
页码:115-118
关键词:基因,Tim-3; 人; 启动子; Luciferase报告基因
摘要:目的克隆人Tim-3基因5端非编码区处具有启动子活性的片段,构建其真核报告质粒,为进一步研究Tim-3表达调控奠定基础。方法以人基因组DNA为模 板,针对人Tim-3启动子5端非编码区处包括翻译起始点ATG和转录起始点TSS在内的-898~+242片段。设计特异性引物,PcR扩增该片段,命 名为Tim-3P2,经双酶切后克隆入pGL3-Basic载体SaeⅠ、XhoⅠ位点,构建pGL3-Tim-3P2荧光素酶报告质粒,与内参照pRL -TK用脂质体法瞬时共转染COS-7、RAW264.7和B16细胞系。通过双荧光素酶活性检测确定其启动子活性。结果rGL3-Tim-3P2经PC R、双酶切及DNA测序分析鉴定正确无误;pGL3-Tim-3P2转染RAW264.7和B16细胞(两种细胞均可表达内源性Tim-3)24h和48 h,双荧光素酶活性检测显示其启动子相对活性约为pGL3-Basic空载体的2倍;而pGL3-Tim-3P2转染不表达内源性Tim-3的COS-7 细胞后检测不到荧光素酶活性。结论成功克隆并构建含有人Tma-3启动子的真核报告质粒。该载体具有特异性Tim-3启动子活性,为进一步研究Tim-3 表达调控奠定了基础。
收录类别:CSCD
资源类型:期刊论文
原文链接:http://kns.cnki.net/kns/detail/detail.aspx?FileName=SDYB200802001&DbName=CJFQ2008
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