标题:用差减cDNA文库筛选由热激导致的小鼠睾丸中差异表达的基因
作者:曹慧仁;杨永杰;杜一;王登宇;孔维华
作者机构:[曹慧仁] 山东大学生命科学学院, 济南, 山东 250100, 中国.;[杜一] 山东大学生命科学学院, 济南, 山东 250100, 中国.;[王登宇] 山东大学生命科学学院, 济南, 山东 更多
来源:山东大学学报. 理学版
出版年:2009
卷:44
期:3
页码:22-27+31
关键词:小鼠; 睾丸组织; 差减cDNA文库; 热敏感基因
摘要:采用抑制性差减杂交(Suppression Subtractive Hybridization,SSH)方法,构建正常和热激小鼠睾丸组织的差减cDNA文库,以期筛选出小鼠生精过程中对热敏感的基因.分别从正常和热激 小鼠睾丸组织提取总RNA,反转录成cDNA,以正常小鼠睾丸组织cDNA作为待检组织(tester),以热激小鼠睾丸组织cDNA作为驱动组织(dr iver),经过2轮杂交和抑制性PCR扩增,产物与T载体连接,经蓝白斑筛选,提取质粒,经EcoRI酶切鉴定插入片段并测序,由此构建了2种组织间差 异表达基因的差减cDNA文库.用半定量RT-PCR方法,进一步验证了该文库中差减出的基因基本上为差异表达的基因.对随机挑选其中的932个克隆测序 ,对有效测序的565个基因序列与GenBank数据库中发布的序列进行同源性比较,大部分片段都可以检索到同源序列.结果显示,cPGES/p23等1 3个基因热激后表达量上调;septin2等120个基因热激后表达量下调.其中cPGES/p23为本研究中首次发现的小鼠生精过程中对热敏感的基因.
收录类别:CSCD
资源类型:期刊论文
原文链接:http://kns.cnki.net/kns/detail/detail.aspx?FileName=SDDX200903006&DbName=CJFQ2009
TOP