标题:反胶束萃取牛血清蛋白的研究
导师:杨延钊
作者:孙青池
论文完成年:2011
论文答辩日期:2011-05-27 00:00:00
学位名称:硕士
关键词:反胶束;;牛血清白蛋白;;萃取;;反萃取;;优化
摘要:反胶束溶液是由表面活性剂、有机溶剂、水、有时添加助表面活性剂组成的热力学稳定的体系。本文介绍了反胶束体系的性质特点及萃取原理,并考察了多种因素对萃取的影响,同时对反胶束萃取技术国内外研究现状进行了总结。 本文以十六烷基三甲基氯化铵为表面活性剂,以正辛醇为助表面活性剂,以异辛烷为有机溶剂制备了热力学稳定的反胶束体系。并使用该反胶束体系萃取热稳定性良好的牛血清白蛋白。在萃取实验中,我们考察了接触时间、助表面活性剂浓度、表面活性剂浓度、水相pH值、离子强度和种类、温度等对萃取的影响。实验结果表明,使用该反胶束体系萃取BSA,4min就能达到萃取平衡。添加助表面活性剂能增加反胶束体系的稳定性,当助表面活性剂浓度过高时,萃取率随浓度升高而降低。萃取率随表面活性剂浓度的增加先增大然后略微减小;随水相pH值的增大而增大;随离子强度的增大而减小;随温度的升高而升高。从热力学角度来分析该萃取过程,发现该过程是熵变控制过程。在最优的萃取条件下,使用该反胶束体系萃取BSA,萃取率高达99.55%。 反萃实验中,使用了两种反萃方法:一种是添加短链醇反萃法。将适量的无水乙醇加入到反萃液中,从而提高反萃效率。实验中我们考察了无水乙醇浓度、反萃液盐浓度、pH值对BSA反萃的影响。在最优的反萃条件下,反萃50min达到平衡,反萃率为85.16%。通过比较萃取前后BSA的圆二谱图,我们发现BSA的结构没有发生变化,因此使用该反萃方法能极好的保护蛋白质的活性。最后实验中发现该反胶束体系第二次循环使用的萃取效果要比第一次循环使用的效果差一些。另一种是添加相反离子表面活性剂反萃法。在反萃过程中将AOT反胶束溶液加入到CTAC反胶束体系中,从而提高反萃的速率和效率。使用该法反萃,8min左右就能达到反萃平衡。实验中我们考察了AOT浓度、反萃液pH值和盐浓度对反萃的影响。实验结果表明,随着AOT浓度的增大,BSA反萃率先增大后减小。在最优的反萃条件下,反萃率高达88.72%。
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