标题:抑制EZH2基因表达的shRNA载体的构建及其作用
作者:吕艳锋[1];韩冰冰[2];禹化龙[1];王建新[1]
作者机构:[吕艳锋;禹化龙;王建新]山东大学第二医院肛肠外科,济南250033,中国.;[韩冰冰]山东中医药大学微循环实验室,济南250014,中国 更多
来源:山东大学学报:医学版
出版年:2013
期:09
页码:31-34
关键词:EZH2基因;RNA干扰;SW480细胞;蛋白质印迹法;MTT法;
摘要:目的构建zeste基因增强予同源物2(EZH2)靶向的小发夹RNA(shRNA)重组表达载体,探讨抑制EZH2基因表达后其在结直肠癌细胞中的作用。方法根据EZH2cDNA序列设计具有短发夹结构的两条DNA序列,与载体pGFP—V—RS构建重组表达载体,鉴定后转染至SW480细胞。将其随机分为阴性对照组和基因沉默组,RT—PCR和蛋白质印迹法检测抑制效果,MTT法检测细胞增殖情况。结果成功构建了抑制EZH2基因表达的干扰质粒。阴性对照组EZH2mRNA的表达是基因沉默组的5.8倍(P〈0.01),基因沉默组EZH2的蛋白明显低于阴性对照组(P〈0.05)。与阴性对照组相比,基因沉默组细胞生长受到明显抑制(P〈0.05)。结论EZH2靶向shRNA重组表达载体构建成功,并能显著抑制EZH2基因的表达,为进一步研究EZH2基因在肿瘤中的作用机制提供了基础。
资源类型:期刊论文
原文链接:http://lib.cqvip.com/qk/95413A/201309/47266238.html
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