标题:丙烯酰胺亚慢染毒大鼠的生物效应标志物的初步研究
导师:于素芳
学号:200312808
作者:易超
论文答辩日期:2005-05-24 00:00:00
关键词:丙烯酰胺,细胞骨架蛋白,神经元特异性烯醇化酶,胶质纤维酸性蛋白,生物标志物,western blotting
摘要:目的 丙烯酰胺(ACR)是一种用途广泛的工业原料。经过三十多年的研究,认为它是一种神经毒性物质和人类可能致癌物,但目前其神经毒性的作用机制仍未完全阐明。本研究将丙烯酰胺亚慢性染毒大鼠,通过测定其血浆中的细胞骨架蛋白、神经元特异性烯醇化酶(NSE)及胶质纤维酸性蛋白(GFAP)含量的变化,为进一步探讨ACR的神经毒性作用机制和寻找生物效应标志物提供线索和依据。 方法 1. 建立动物模型 成年雄性Wistar大鼠随机分为对照组、低剂量组和高剂量组。低、高剂量组分别以20mg/kg体重和40mg/kg体重剂量腹腔注射ACR染毒,每周3次,连续8周;对照组腹腔注射等体积生理盐水。 2. 神经行为的改变和步态评分 密切观察各组大鼠的一般状况和神经行为的改变,测量大鼠体重,给出步态评分。 3. 血浆中蛋白含量的测定 1) 血浆中细胞骨架蛋白的检测 通过western blotting测定各组大鼠血浆中神经丝(NF)(NF-L,NF-M,NF-H)、肌动蛋白(β-actin)、微管蛋白(α-tubulin,β-tubulin)、微管相关蛋白(tau、MAP2)相对含量的变化。 2) 血浆中NSE、GFAP的检测 通过western blotting测定各组大鼠血浆中NSE、GFAP相对含量的变化。 结果 1. 体重与步态评分的结果:与对照组相比,ACR染毒组大鼠体重减轻,高剂量组第 4~8周体重下降(P<0.05﹚。与对照组比较,ACR染毒组大鼠步态评分增高,低剂量组第8周出现增高(P<0.01﹚,高剂量组第4-8周出现增高(P<0.01﹚。 2. 蛋白相对含量测定结果:Western blotting的结果经化学发光法显色,并结合积分光密度(IOD)分析表明,与对照相比,细胞骨架蛋白、NSE和GFAP均发生了不同程度的改变。 1) NF-L,NF-M和NF-H:与对照相比,低剂量组无显著差异;高剂量组分别降低了37.4%(P<0.01﹚,74.7%(P<0.01﹚和69.5%(P<0.01﹚。 2) β-actin,tau和MAP2:与对照相比,β-actin和tau在低剂量组无显著差异,MAP2在低剂量组升高了12.2%(P<0.05);高剂量组分别降低了54.1%(P<0.01﹚,42.2%(P<0.01﹚和14.5%(P<0.01﹚。 3) α-tubulin和β-tubulin:与对照相比,低剂量组分别升高了44.4%(P<0.01﹚和30.4%(P<0.01﹚;高剂量组α-tubulin升高了224.0%(P<0.01﹚,β-tubulin无显著差异。 4) NSE和GFAP:与对照相比,低剂量组无显著变化;高剂量组NSE降低了25.2%(P<0.01﹚,GFAP升高了27.1%(P<0.05﹚。 结论 1. ACR亚慢性染毒可能引起神经系统损伤,表现为大鼠体重下降和步态异常。 2. 血浆中部分骨架蛋白有可能作为ACR神经病的生物效应标志物。表现为ACR亚慢染毒可引起大鼠血浆中细胞骨架蛋白NF-L、NF-M、NF-H、β-actin、α-tubulin、β-tubulin、tau、MAP2相对含量发生不同程度改变。 3. 血浆中NSE和GFAP有可能作为ACR神经病的生物效应标志物。ACR亚慢性染毒可引起大鼠血浆中NSE和GFAP相对含量改变。 4. ACR的神经毒性作用机制可能与细胞骨架蛋白有关。
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