标题:人源化抗血小板膜糖蛋白Ⅵ单链抗体的研究
作者:冀学斌;侯明;张春青;石艳;彭军;初晓霞;马道新;李丽珍
作者机构:[冀学斌] 山东大学齐鲁医院肿瘤中心血液科, 济南, 山东 250012, 中国.;[侯明] 山东大学齐鲁医院肿瘤中心血液科, 济南, 山东 250012, 中国.;[张春青] 山东大学齐鲁 更多
来源:中华血液学杂志
出版年:2009
卷:30
期:9
关键词:紫癜; 血小板减少性; 特发性; 自身抗体; 血小板聚集; 人源化单链抗体; 噬菌体抗体库技术
摘要:目的 用噬菌体抗体库技术研究抑制血小板聚集功能的人源化抗血小板膜糖蛋白(GP)Ⅵ单链抗体.方法 从特发性血小板减少性紫癜(ITP)患者血浆中用单克隆抗体特异性俘获血小板抗原(MAIPA)技术和血小板聚集实验筛选出抑制血小板聚集的抗血小板GP Ⅵ自身抗体.从抗GPVI自身抗体阳性患者外周血淋巴细胞中提取mRNA,用RT-PCR扩增出人免疫球蛋白重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)基因 片段,用连接DNA将VH和VL连接成单链抗体(ScFv)基因片段.用限制性内切酶SfiⅠ/Not Ⅰ酶切ScFv基因片段后克隆到噬菌体载体pHEN2,然后转化大肠杆菌TG1.用辅助噬菌体M13 K07援救转化后的TG1,产生单链抗体.用抗原吸附法经过5轮吸附洗脱富集,得到纯化的抗GPⅥ单链抗体,并研究其对血小板聚集功能的影响.结果 806例慢性ITP患者中11例(1.36%)血浆中抗GPⅥ自身抗体阳性,2例(0.24%)明显抑制胶原诱导的血小板聚集功能.扩增出380~400 bp大小的VH和VL基因,用连接肽(Gly_4Ser)_3成功地连接成约800 bp大小的ScFv基因片段.将ScFv克隆到pHEN2并转化大肠杆菌TG1后,形成4.1*10~7个克隆.用辅助噬菌体M13K07援救TG1后产 生的抗体滴度为2.62*10~(10)cfu/ml.亲和层析后得到的纯化抗体可抑制胶原诱导的血小板聚集而对二磷酸腺苷(ADP)诱导的血小板聚集无 明显影响.结论 利用噬菌体抗体库技术表达的人源化抗血小板GPⅥ抗体ScFv片段可抑制血小板聚集功能.
收录类别:CSCD
资源类型:期刊论文
原文链接:http://lib.cqvip.com/qk/93752X/200909/31790234.html
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