标题:易错PCR技术定向进化褐藻胶裂解酶Alg-2的分析
作者:李树; 张伟; 赵春梅
作者机构:[李树]山东大学(威海)海洋学院, 威海, 山东 264209, 中国;[张伟]江南大学生物工程学院, 工业生物技术教育部重点实验室, 无锡, 江苏 214122, 中国;[赵春梅]江南大 更多
来源:食品科学
出版年:2019
卷:40
期:4
页码:146-151
关键词:易错PCR; 定向进化; 褐藻胶裂解酶; 氨基酸序列
摘要:为提高褐藻胶裂解酶活力,采用易错聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)技术对海洋细菌Tamlana sp.; S12中具有代表性的酶组分Alg-2进行体外定向进化。经过2轮易错PCR及96孔板发酵筛选,分别获得2株正突变和2株负突变菌株,其酶比活力分别是; 亲本(2 675.2; U/g)的162%、241%、53%、11%。酶的动力学分析显示,正突变株P2-81的Km值比亲本降低50%,而负突变株N2-47的Km值比亲本; 提高106%,表明突变株对底物的亲和力有极大的上升和下降。基因测序及氨基酸序列分析结果表明,Glu、Thr、Ser、Asp和Tyr对褐藻胶裂解酶; 活力提高起到正面的积极作用,而Lys的突变起到负面的消极作用,后续人工合成的定点突变则进一步证实Asp和Lys的正/负作用。本研究有助于深入理解; 褐藻胶裂解酶的催化机制,为后续利用理性设计手段改造褐藻胶裂解酶提供理论参考。
收录类别:EI;CSCD
资源类型:期刊论文
原文链接:http://kns.cnki.net/kns/detail/detail.aspx?FileName=SPKX201904023&DbName=CJFQ2019
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