标题:染色体驱动蛋白KIF4A稳定低表达胃癌细胞系的构建及鉴定
作者:钟铠泽[1];赵健[1];李陪[2];陈蔚文[3];朱长军[2];董智雄[2]
作者机构:[钟铠泽;赵健]山东大学齐鲁医院胸外科,济南250012,中国.;[李陪;朱长军;董智雄]天津师范大学分子细胞系统生物学重点实验室,300387,中国.;[陈蔚文]山东大学医学院生 更多
来源:国际生物医学工程杂志
出版年:2014
期:01
页码:22-25,后插4-后插5
DOI:10.3760/cma.j.issn.1673-4181.2014.01.005
关键词:KIF4A;有丝分裂;纺锤体中央区;小分子干扰RNA;胃癌细胞;
摘要:目的 构建稳定低表达染色体驱动蛋白KIF4A的胃癌细胞系,观察KIF4A低表达细胞的有丝分裂期纺锤体中央区的形成.方法 针对人类驱动蛋白KIF4A mRNA的编码区设计特异性siRNA序列,构建KIF4A短发夹RNA(shRNA)表达质粒pGPU-GFP-KIF4A.将质粒转染胃癌细胞SGC-7901,经过G418筛选获得稳定低表达KIF4A的细胞株.使用蛋白免疫印迹方法鉴定细胞株内KIF4A蛋白的敲降效果,并通过细胞免疫荧光染色法观察细胞纺锤体中央区的形成.结果 成功获得了3株不同水平稳定低表达KIF4A的SGC-7901细胞株(SGC-shKIF4A)和稳定表达无意义shRNA的对照细胞(SGC-shNC);同时,与对照细胞SGC-shNC相比,SGC-shKIF4A细胞中有丝分裂纺锤体中央区延长,并随KIF4A蛋白表达水平的降低而增加.结论 成功构建了不同水平稳定低表达KIF4A蛋白的胃癌细胞SGC-shKIF4A,为进一步研究驱动蛋白分子KIF4A的功能及其在胃癌发生发展过程中的作用奠定基础.
资源类型:期刊论文
原文链接:http://lib.cqvip.com/qk/92870A/201401/48949140.html
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