标题:菠菜叶绿体基因组定点整合表达载体构建及原核表达
作者:耿晓霞;王文超;侯丙凯
作者机构:[耿晓霞] 山东大学生命科学学院, 植物细胞工程与种质创新教育部重点实验室, 济南, 山东 250100, 中国.;[王文超] 山东大学生命科学学院, 植物细胞工程与种质创新教 更多
来源:山东大学学报. 理学版
出版年:2010
卷:45
期:1
页码:46-54
关键词:菠菜; 叶绿体转化; 栽体构建; 定点整合; GFP基因
摘要:分析菠菜叶绿体基因组全序列,选用了rbcL基因和accD基因的间隔区作为外源基因的定点整合位点,并从菠菜叶绿体基因组中克隆了rbcL基因全长和a ccD基因的5\'端部分,长度分别为1956 bp和1320 bp.以这2个DNA片段作为同源重组片段,以烟草叶绿体基因的启动子Prm和终止子psbA3\'控制外源基因的转录,构建了包含筛选标记基因aadA基 因(编码氨基糖苷-3-腺苷酸转移酶,具有壮观霉素和链霉素抗性)和报告基因GFP(编码绿色荧光蛋白)的菠菜叶绿体基因组定点整合表达载体pRAGA. 酶切结果显示构建正确.将该载体转化大肠杆菌,在激光扫描共聚焦显微镜下用488nm蓝光激发,发现大肠杆菌发出强烈的绿色荧光,而对照茵体没有荧光,表 明GFP基因在原核大肠杆茵中已经成功表达.实验结果说明构建的菠菜叶绿体定点整合表达载体pRAGA可以用于菠菜叶绿体转化.
收录类别:CSCD
资源类型:期刊论文
原文链接:http://kns.cnki.net/kns/detail/detail.aspx?FileName=SDDX201001010&DbName=CJFQ2010
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