标题:抗赭曲霉毒素A单克隆抗体的制备及其ELISA检测方法的建立
作者:侯霄煜;温红玲;闫玉芬;宋艳艳;许洪芝;赵丽;李凤琴
作者机构:[侯霄煜] 山东大学公共卫生学院卫生检验研究所, 济南, 山东 250012, 中国.;[温红玲] 山东大学公共卫生学院卫生检验研究所, 济南, 山东 250012, 中国.;[闫玉芬] 山 更多
来源:山东大学学报. 医学版
出版年:2009
卷:47
期:10
关键词:赭曲霉犊素A; 单克隆抗体; 细胞融合; 酶联免疫吸附试验
摘要:目的 制备抗赭曲霉毒素A(OA)的单克隆抗体(McAb)并对其进行初步鉴定,在此基础上建立竞争抑制酶联免疫吸附试验(ELISA)用于OA的检测.方法 采用小剂量长周期的免疫方案,以OA-牛血清白蛋白(BSA)偶联物免疫雌性BALB/c小鼠,采用细胞融合法获得分泌抗OA的McAb的杂交瘤细胞株, 用竞争抑制ELISA法进一步检测McAb的特异性,腹水诱生法大量制备McAb,以OA为竞争抗原,建立检测OA的竞争抑制ELISA.结果 OA-BSA免疫的BALB/c小鼠血清效价为1:512030,与BSA有强烈的交叉反应.细胞融合后,ELISA筛选抗体分泌阳性的杂交瘤细胞株,抗 OA-BSA的McAb与BSA的交叉反应率仅为3.5%,对分泌抗OA-BSA特异的McAb的细胞株经3轮克隆化,抗体分泌阳性率达到100%,建立 了1株能稳定分泌抗OA-BSA McAb的杂交瘤细胞株,竞争抑制法进一步证明了该抗体是特异针对OA的,腹水诱生法制备了大量的McAb.竞争抑制ELISA线性范围为0.24~12 5ng/mL,线性方程y=-0.113 210gx+0.901 6,相关系数r=0.98,最低检出浓度为0.24 mg/mL.样品的加标回收率为97.07%~107.83%.结论 获得了分泌抗OA的McAb的杂交瘤细胞株,建立了OA检测的简单、灵敏、高效的ELISA检测方法.
收录类别:CSCD
资源类型:期刊论文
原文链接:http://lib.cqvip.com/qk/95413A/200910/32177761.html
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