标题:大鼠膜联蛋白A2真核表达载体的构建及表达
作者:刘庆梅;怀娟;张杨;姜虹;岳寿伟
作者机构:[刘庆梅] 山东大学齐鲁医院康复科, 济南, 山东 250012, 中国.;[怀娟] 山东大学齐鲁医院康复科, 济南, 山东 250012, 中国.;[张杨] 山东大学齐鲁医院康复科, 济南, 更多
来源:中国康复医学杂志
出版年:2010
卷:25
期:10
页码:937-941+952
关键词:背根神经节; 膜联蛋白A2; 真核表达载体; Western印迹; 免疫荧光
摘要:目的:克隆大鼠背根神经节膜联蛋白A2(annexin Ⅱ)的基因,构建真核表达载体并检测其表达.方法:以RT-PCR法扩增大鼠背根神经节(DRG)细胞中膜联蛋白A2(annexin Ⅱ)的基因,构建pGMT-Anxa2克隆载体,以此为模板插入flag标签扩增Anxa2-flag序列,将其定向插入真核表达载体pcDNA3.1( +),获得表达载体pcDNA3.1(+)-Anxa2-flag.以PCR,双酶切及序列测定法鉴定该质粒.以脂质体法将表达载体转染到HEK293细 胞中, Western印迹和细胞免疫荧光检测annexin Ⅱ蛋白表达及细胞内定位.结果:PCR扩增Anxa2-flag片段大小与预期相同.通过PCR,HindⅢ和NotⅠ双酶切及测序鉴定,证明构建出了含 大鼠annexin Ⅱ基因的真核表达载体.Western印迹和细胞免疫荧光的检测表明大鼠annexin Ⅱ基因稳定表达,并可在胞膜和胞质中广泛表达.结论:成功构建pcDNA3.1(+)-Anxa2-flag真核表达载体,并稳定表达蛋白,为研究ann exin Ⅱ调控DRG伤害性感受传导的分子机制奠定基础
收录类别:CSCD
资源类型:期刊论文
原文链接:http://kns.cnki.net/kns/detail/detail.aspx?FileName=ZGKF201010005&DbName=CJFQ2010
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