标题:重组肠道病毒71型反向遗传系统构建
作者:李静;孙乐乐;郝树彬;庄志超;赵丽;王志玉;温红玲
作者机构:[李静] 山东大学公共卫生学院病毒学研究室, 实验畸形学教育部重点实验室, 济南, 山东 250012, 中国.;[孙乐乐] 山东大学公共卫生学院病毒学研究室, 实验畸形学教育 更多
来源:中国公共卫生
出版年:2016
卷:32
期:10
页码:1437-1440
DOI:10.11847/zgggws2016-32-10-37
关键词:肠道病毒71型; 反向遗传技术; 3CD蛋白
摘要:目的利用反向遗传技术分别对肠道病毒71型(EV71)强毒株SDLY107和弱毒株SDLY1的3C和3CD编码区进行置换,拯救重组病毒。方法使用P CR技术得到重组片段3C(1)-3D-3\'UTR(107)和3CD(1)-3\'UTR(107),并克隆入pMD19-T。利用双酶切、T4连接酶将 两种重组3CD-3\'UTR分别置换入本室构建并保存的EV71的SDLY107株的感染性cDNA克隆pMD19-T-107,得到重组pMD19-T -107后,将其线性化并转染入横纹肌肉瘤(RD)细胞,盲传得到重组病毒107(1-3C)和107(1-3CD)。对收获病毒进行鉴定。结果构建了重 组EV71全长cDNA克隆;RNA转染并盲传至第3代,36h后RD细胞出现细胞病变(CPE),48h出现明显的CPE,成功拯救重组病毒SDLY1 07(1-3C)和SDLY107(1-3CD);重组病毒产生的CPE更接近SDLY107。结论成功构建了重组EV71反向遗传系统,拯救了重组病毒 SDLY107(1-3C)和SDLY107(1-3CD),为进一步研究3C与3D蛋白在EV71致病机制中的作用提供基础。
收录类别:CSCD
资源类型:期刊论文
原文链接:http://lib.cqvip.com/qk/94139X/201610/670273676.html
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