标题:小鼠CTLA4-Ig融合蛋白的表达、纯化及活性测定
作者:张蘋;张利宁;刘军莉;王群;宋静;王晓燕
作者机构:[张蘋] 山东大学医学院免疫学研究所, 济南, 山东 250012, 中国.;[张利宁] 山东大学医学院免疫学研究所, 济南, 山东 250012, 中国.;[刘军莉] 山东大学医学院免疫学 更多
来源:山东大学学报. 医学版
出版年:2004
卷:42
期:4
页码:373-376
关键词:融合蛋白; 混合淋巴细胞培养; 增殖; 基因表达
摘要:目的:在真核细胞中表达CTLA4-Ig融合蛋白,获得纯品并测定其生物学活性.方法:用电转染的方法将真核表达载体pREP7-CTLA4-IgG2c 转染SP2/0细胞,经300mug/ml的潮霉素筛选得到阳性克隆;大量培养后收集合有重组CTLA4-IgG2c的细胞培养上清,用rProtein A亲和层析柱纯化CTLA4-Ig.用还原和非还原性SDS-PAGE和蛋白印迹进行鉴定.采用单向混合淋巴细胞培养(3H掺入法)测定CT-LA4-I g对T细胞增殖的抑制效应.结果:阳性克隆大量培养的细胞上清经rPrtotein A亲和层析后得到纯化CTLA4-Ig.还原条件下SDS-PAGE和Western blot的结果显示在55 KD出现目的蛋白条带;在非还原条件下SDS-PAGE和Western blot在130 KD处出现目的蛋白条带.混合淋巴细胞培养5 d的结果显示,CTLA4-Ig浓度为10mug/ml时可以抑制T细胞的增殖;20 mug/ml时抑制达到最大程度(P<0.05);继续增加CTLA4-Ig的浓度,其抑制作用不再增强.3、7 d时的抑制作用不明显.结论:在SP2/0中表达了小鼠CTLA4-Ig融合蛋白,该融合蛋白能抑制T细胞的增殖.
收录类别:CSCD
资源类型:期刊论文
原文链接:http://kns.cnki.net/kns/detail/detail.aspx?FileName=SDYB200404000&DbName=CJFQ2004
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