标题:原核表达人41型腺病毒(Ad41)蛋白V及其抗血清的制备
作者:董流昕;邹小辉;宋敬东;屈建国;鲁茁壮;洪涛
作者机构:[董流昕] 中国疾病预防控制中心,病毒病预防控制所, 北京 100052, 中国.;[宋敬东] 中国疾病预防控制中心,病毒病预防控制所, 北京 100052, 中国.;[屈建国] 中国疾病 更多
来源:微生物学报
出版年:2009
卷:49
期:5
页码:673-677
关键词:难养性; 抗血清
摘要:[目的]人肠腺病毒Ad41被称为难养腺病毒,其难以培养的特性可能与次要核心蛋白V(Ad41 proteinv,pV)表达不充分有关.本研究拟表达纯化Ad4l pV抗原,免疫动物制备抗血清,为研究Ad41难养性机理打下基础.[方法]以野生型Ad41基因组DNA为模板,PCR扩增pV,克隆到原核表达载体p ET30a(+),测序后,转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株,异丙基-beta-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导目的蛋白表达,固化金属亲和层析( IMAC)方法纯化,免疫BALB/c小鼠制备抗血清,将获得的抗血清用于Western blot检测Ad41感染各细胞系后pV的表达.[结果]克隆得到包括完全编码区的pV基因,表达质粒转化BL21(DE3)菌株,使用1 mmol/LIPTG 37(0)C诱导4 h,pV以包涵体形式表达,或使用0.5 mmol/L IPTG 25℃诱导8 h获得可溶性表达.利用皮下多点注射包涵体的方法免疫小鼠,得到抗pV抗血清;使用纯化的可溶性pV作为抗原对抗血清进行了鉴定,表明该抗血清可用于We stern blot检测.等量野生型Ad4l感染293或293E12细胞(一株稳定表达Ad41ElB55K基因的293细胞)后,pV在293E12细胞的表达 明显高于293细胞.[结论]成功克隆了Ad41 pV基因,表达纯化了重组蛋白,获得了可用于Western blot检测的抗血清,为进一步研究Ad41难养性机理打下了基础.
收录类别:CSCD
资源类型:期刊论文
原文链接:http://kns.cnki.net/kns/detail/detail.aspx?FileName=WSXB200905025&DbName=CJFQ2009
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